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葡聚糖凝膠使用方法

更新時間:2016-11-02      點擊次數(shù):4790

乙醇浸泡

    在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。

無鹽水浸泡

    室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹。

鹽酸浸泡

    在常溫下再用0.1M HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性。

裝柱

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。

平衡

上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的BufferPH值)。

上樣

凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為51即可。

洗脫方法

    可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

清洗

    每次用完之后,將柱子里的緩沖液置換為去離子水,然后用20%的乙醇封存。

在位清洗(CIP

     凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

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