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在制備干粉培養(yǎng)基的過程中,應該注意什么?

更新時間:2019-11-19      點擊次數:2594
     干粉培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。
 
    干粉培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。
 
    干粉培養(yǎng)基若采用不適當的加熱和滅菌條件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此,培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件,應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外,對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致干粉培養(yǎng)基的過熱,過度滅菌可能會破壞絕大多數的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此,應根據滅菌培養(yǎng)基的特性,進行全面的滅菌程序驗證。
 
    在制備干粉培養(yǎng)基的過程中,要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據不同的情況,經過一定的處理,洗刷干凈。干粉培養(yǎng)基有的還要進行包裝,經過滅菌等準備就緒后,才能使用。
 
    1、新購的玻璃器皿
 
    除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數小時,使游離的堿性物質除去,再以流水沖凈。對容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸,數分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。
 
    2、用過的玻璃器皿
 
    凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時沖洗,吸取過化學試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數量后再集中進行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經過適當消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿,可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。洗液的主要成份是重鉻酸鉀和濃流酸,其作用是將有機物氧化成可溶性物質,以便沖洗。洗液有很強的腐蝕作用,使用時應特別小心,避免濺到衣服、身體和其他物品上。
 
    應確定每批干粉培養(yǎng)基滅菌后的 pH(冷卻至室溫 25℃測定)。若培養(yǎng)基處方中列出 pH 的范圍,除非經驗證表明培養(yǎng)基的 pH 允許的變化范圍很寬,否則,pH的范圍不能超過規(guī)定的±0.2。
 
    制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應進行下列檢查:容器和蓋子不得破裂,裝量應相同,盡量避免形成氣泡,固體培養(yǎng)基表面不得產生裂縫或漣漪,干粉培養(yǎng)基在冷藏溫度下不得形成結晶,不得污染微生物等。應檢查和記錄批數量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。
 
    培養(yǎng)基的貯存
 
    自配的培養(yǎng)基應標記名稱、批號、配制日期等信息,并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標簽上應標有名稱、批號、生產日期、失效期及培養(yǎng)基的有關特性,生產商和使用者應根據培養(yǎng)基使用說明書上的要求進行保存,所采用的保藏和運輸條件應使成品培養(yǎng)基限度的失去水分并提供機械保護。
 
    干粉培養(yǎng)基菌后若儲藏在高壓滅菌器中,質量可能會受影響,一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在 0℃或 0℃以下存放,因為冷凍可能破壞凝膠特性。
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